А   Б  В  Г  Д  Е  Є  Ж  З  І  Ї  Й  К  Л  М  Н  О  П  Р  С  Т  У  Ф  Х  Ц  Ч  Ш  Щ  Ю  Я 


Аналіз - фізіологічна рідина

Аналіз фізіологічних рідин (плазми крові, сечі, екстрактів тканин ссавців) проводять на довгій колонці (150 см) в дещо інших умовах. Ефективність поділу зростає завдяки тривалому (11 год,330 мл) елюі-вання буферним розчином з рН 325 при 30 С.

Метод аналізу фізіологічних рідин в дійсності є розширеним варіантом методу аналізу білкових гідролізатів; він дозволяє розділити більше 50 амінокислот або споріднених сполук, тоді якза методом аналізу білкових гідролізатів вдається визначити 20 звичайних амінокислот. Тому при виборі методу аналізу потрібно брати до уваги не джерело взяття проби, а її справжність і склад. Пробний аналіз слід проводити за такою методикою, щоб можна булоповністю кількісно визначити всі амінокислоти, які передбачаються в пробі.

Є друга схема аналізу, яка забезпечує краще поділ амінокислот при аналізі фізіологічних рідин і дає можливість аналізувати більшу кількістьамінокислот.

Порівняно недавно синтезована смола типу UR-40 яка дозволяє визначати кислі і нейтральні амінокислоти по методиці аналізу фізіологічних рідин за 170 хв на колонці висотою 26 см. Основні амінокислоти фізіологічних рідин такожможуть бути визначені на цій же колонці за 210 хв. Одноколоночний метод аналізу білкових гідролізатів на цій смолі описаний в разд. Використання більш коротких колонок і поліпшення поділу піків амінокислот стало можливим завдяки усуненню специфічнихперемішувальних вузлів (таких, як реактор, що підводять трубки, крани та кювети), наявних в більшості приладів.

Pазрабативаемие методики аналізу цих сполук припускають використання класичних двухколоночних систем (сильно утримувані з'єднанняосновного характеру аналізують на короткій колонці, а з'єднання нейтрального і кислотного характеру - на довгій колонці), а також систем з однією колонкою. Спочатку розглянемо два приклади процедур, призначених для прискорення аналізів фізіологічних рідин накороткою і довгою колонках, а далі наведемо приклад розробки дуже швидкої одноколоночной методики аналізу амінокислот, що містяться в продуктах гідролізу.

У цьому розділі ми розглянемо дві такі системи, застосовувані для аналізу фізіологічних рідин,щоб показати, що методом іонообмінної хроматографії можна проводити поділ дуже складних сумішей. На рис. 8.9 показаний аналізатор для речовин, що поглинають в ультрафіолетовій області, а на рис. 8.10 - аналізатор вуглеводів, що містяться у фізіологічних рідинах.

У цьому розділі ми розглянемо дві такі системи, застосовувані для аналізу фізіологічних рідин, щоб показати, що методом іонообмінної хроматографії можна проводити поділ дуже складних сумішей. На рис. 8.9 показаний аналізатор для речовин, що поглинають в ультрафіолетовій області, а на рис. 8.10 - аналізатор вуглеводів, що містяться у фізіологічних рідинах.

Існує два основні методи, придатних для хромато-графічного аналізу амінокислот. Один метод призначений для аналізу амінокислот білкових гідролізатів, інший - для аналізу фізіологічних рідин. Опис цих методів наведено нижче.

При аналізі фізіологічних рідин основне завдання полягає в тому, щоб розділити всі наявні компоненти на одній колонці і визначити обсяги їх виходу в ідентичних умовах, У зв'язку з цим слід відзначити роботу Гамільтона[41], В якій вказані обсяги виходу 180 речовин. Ці дані можна використовувати для ідентифікації компонентів фізіологічних рідин, а також для вибору умов аналізу нінгідрінположітельних речовин природних сумішей.

Спакман, Стейн і Мур[12]запропонували метод аналізу кислих і нейтральних амінокислот на колонці розміром 150 XX 0.9 см при використанні двох буферів, замінних один на інший в середині аналізу. Для аналізу основних амінокислот, зазвичай зустрічаються в пептидних і білкових гидролизатах, застосовується колонка розміром 15 X Х0 9 см. За цією методикою для кожної колонки потрібна окрема проба; проте методика іметвт великі можливості. Так, якщо необхідні відомості тільки про декілька основних амінокислотах, наприклад, у випадку аналізу фізіологічних рідин, то вони можуть бути отримані без попереднього елюювання кислих і нейтральних амінокислот, які при одноколоночном методі елюіруются в першу чергу.

Цьому сприяло також вдосконалення і створення сферичних іонообмінних смол, які використовуються в спеціальних хроматографічних системах. Поліпшені смоли дають можливість використовувати більш короткі колонки при збереженні достатнього числа теоретичних тарілок, яке дозволяє розділяти велика кількість різних амінокислот, хроматографіруемих зазвичай за більш складною методикою аналізу фізіологічних рідин. Так, реальністю став аналіз кислих і нейтральних амінокислот більш складних фізіологічних рідин, що наблизився за часом до аналізу простих білкових гідролізу /тов.