А   Б  В  Г  Д  Е  Є  Ж  З  І  Ї  Й  К  Л  М  Н  О  П  Р  С  Т  У  Ф  Х  Ц  Ч  Ш  Щ  Ю  Я 


Амфолітом-носій

Амфолітом-носії, синтезовані Вестербергом[2, 14], Являють собою гетерогенну суміш різних поліамінів-полікарбонових кислот досить низького молекулярного ваги.

Схема колонки конструкції Вестерберга і. Pабочейчастиною колонки, в якій поміщаються амфолітом-носії і створюється градієнт щільності, є камера, що має в поперечному розрізі вигляд кільця. Нижній електродний розчин забезпечує контакт з нижнім електродом, розташованим в - центральній трубці; таким шляхомдосягається відвід газів з електродного простору без порушення градієнта щільності.

Полярність електродів слід встановлювати таким чином, щоб амфолітом-носії з більш високою електропровідністю потрапляли в нижню частину колонки, де електропровідність знижена через високу концентрацію сахарози. Амфо-літи з ізоточкамі в області рН 6 - 7 мають порівняно низькою електропровідністю. Тому при роботі в області рН нижче 7 вгорі поміщають катод, а при роботі в основній середовищі вгорі знаходиться анод. При фракціонуванні сирих екстрактів зручно встановлювати полярність таким чином, щоб домішки накопичувалися внизу колонки, в особливості якщо вони схильні випадати в осад.

У разі необхідності зразок діалізу проти води, що містить амфолітом-носії.

Контрольне електрофокусірованіе в градієнті щільності на колонці об'ємом 110 мл у відсутність зразка. Визначення білка за Лоурі в даному випадку не застосовується[41], Оскільки амфолітом-носії дають сильну реакцію. Задовільні результати вдається отримати після діалізу або осадження білка трихлороцтової кислотою.

Потім проводять поділ досліджуваної проби, збільшивши тривалість процесу на 25%, щоб забезпечити фокусування тих сполук, які рухаються повільніше. Навіть якщо амфолітом-носії додані після полімеризації, все ж рекомендується не проводити експеримент занадто довго.

Для багатьох білків цього цілком достатньо, оскільки невдовзі зони проявляються у вигляді білих смуг. Однак якщо необхідно забарвити білок, спочатку слід видалити амфолітом-носії, оскільки вони дають інтенсивне забарвлення з більшістю барвників для білка.

У такому випадку в середовище додають надлишок відповідної солі. Часто використовують імунологічне визначення, в цьому випадку аналізу не заважають ні амфолітом-носії, ні сахароза.

Найбільш поширеним методом є визначення оптичної щільності при 280 нм. Цей метод володіє достатньою чутливістю, дозволяє вести аналіз в потоці і не супроводжується втратою речовини. Однак самі амфолітом-носії володіють сильним поглинанням при 280 нм, і коливання в оптичних властивостях окремих сполук можуть бути помилково прийняті за зони білка. Відхилення від нульової лінії невелико як при биуретовой реакції так і при записі поглинання при 280 нм. Фон при 254 нм досить великий. Тому звичайні проточні денситометри, де аналіз ведеться при 254 нм (лінія ртуті), непридатні у випадку електрофокусірованія.