А   Б  В  Г  Д  Е  Є  Ж  З  І  Ї  Й  К  Л  М  Н  О  П  Р  С  Т  У  Ф  Х  Ц  Ч  Ш  Щ  Ю  Я 


Флуорохромірованіе

Флуорохромірованіе проводять або прижиттєве, або на фіксованих препаратах. Прижиттєве флуорохромірованіе в свою чергу може бути здійснено або на цілому тваринному або рослинному організмі (шляхом ін'єкції або введення з їжею), або на окремих тканинах і клітинах. Прижиттєве флуорохромірованіе особливо корисно при дослідженнях функціонального стану і фізико-хімічної характеристики органів, тканин і клітин.
 Флуорохромірованіе розчином берберінсульфата (1: 1000) дає іозможность з мінімальними витратами часу спостерігати особливості будови кутикули волосся.

Флуорохромірованіе тимчасових фіксованих препаратів виробляють, як для постійних препаратів, але з тією лише різницею, що після промивання їх відразу ж дивляться під мікроскопом.

Метод флуорохромірованія сконцентрованих з води на мембранних фільтрах бактерій з подальшим їх люмінесцентно-мікроскопіч-ським підрахунком розроблений в зв'язку з потребами практики в експресному визначенні загальної мікробної забрудненості води.

Метод флуорохромірованія заснований на фарбуванні клітин суспензії флуоресціюючими барвниками - флуорохромами. Звідси неважко сформулювати вимогу до застосовуваних флуорохромов.

Основні характеристики деяких органічних сцинтиляторів. Використання флуорохромірованія дуже сильно розширило можливості люмінесцентної мікроскопії.

З іншого боку, при флуорохромірованіі акридиновим помаранчевим мертві клітини виявляють яскраво-червону, а живі яскраво-зелену люмінесценцію. Це дозволяє легко відрізняти їх один від одного. Подібну ж методику використовують при діагностиці ракових захворювань. В цьому випадку світіння флуорохромов дозволяє безпомилково відрізняти здорові клітини від клітин, уражених раком.

Дані короткі вказівки щодо розроблених автором методів флуорохромірованія і спостерігається при цьому флуоресценції клітин кровотворних органон.

На підставі цих даних були запропоновані способи флуорохромірованія бактерій, що містяться у воді водойм, і суспензії культур бактерій у воді, не підданих будь-якій обробці, для встановлення співвідношення живих і відмерлих в результаті природних процесів клітин.

На підставі цих даних були запропоновані способи флуорохромірованія бактерій, що містяться у воді водойм, і суспензії культур бактерій у воді, не підданих будь-якій обробці, для встановлення співвідношення живих і відмерлих в результаті природних процесів клітин.

Обробку препаратів нуклеазами і екстрагентами проводять перед флуорохромірованіем. При цьому бажано ставити контроль на дію самих розчинів в тих же умовах (буфер, рН, температура, експозиція), але без нуклеаз.

Останнім часом поширення набуває так званий метод флуорохромірованія.

Люмінесцентна картина крові надзвичайно барвиста, особливо при суправітально флуорохромірованіі акридиновим помаранчевим. Лейкоцити і лімфоцити люминесцируют зеленим світлом з різними відтінками. Особливо яскраво світяться ядра.

У роботі[34J описано применение люминесцентной микроскопии и флуорохромирования для изучения срезов семян злаков и выявления белка.

Ценные результаты по изучению тонкой структуры микробной клетки получены при помощи флуорохромирования акридиновым оранжевым, аурофосфином и берберином.
Метод заключается в концентрировании бактерий из воды на нелюминесцирующий мембранный фильтр, флуорохромировании акридиновым оранжевым, приготовлении препарата и раздельном просчете под люминесцентным микроскопом числа живых ( зеленых) и мертвых ( красных) клеток.
При разработке метода нами были проведены специальные исследования условий приготовления микроскопических препаратов, флуорохромирования и применения различных цитохимических обработок.
Метод заключается в концентрй ровании бактерий из воды на нелюминесцирующий мембранный фильтр, флуорохромировании акридиновым оранжевым, приготовлении препарата и раздельном просчете под люминесцентным микроскопом числа живых ( зеленых) и мертвых ( красных) клеток.
Краситель для обычной и флуоресцентной микроскопии, В бактериологии, микробиологии, гистологии, вирусологии преимущественно для выявления туберкулезных бактерий, гонококков и флуорохромирования нервньтх клеток.
Можно фиксировать и в формалине; следует, однако, помнить, что этот фиксатор вызывает частичную деполимеризацию дезоксирибонуклеиновой кислоты. Флуорохромирование осуществляют водными или спиртовыми растворами флуорохромов ( 1: 1 - 2 тысячи) в течение 10 - 30 секунд или, если концентрация раствора флуо-рохрома еще меньше, несколько дольше. В ряде случаев водные растворы флуорохромов целесообразно готовить на буферных растворах.
Флуорохромирование проводят либо прижизненное, либо на фиксированных препаратах. Прижизненное флуорохромирование в свою очередь может быть осуществлено или на целом животном или растительном организме ( путем инъекции или введения с пищей), или на отдельных тканях и клетках. Прижизненное флуорохромирование особенно полезно при исследованиях функционального состояния и физико-химической характеристики органов, тканей и клеток.
Этот краситель дает яркую флуоресценцию всех микроорганизмов природной воды, разнообразных по видовому составу, хорошо дифференцирует бактериальные клетки от посторонних частичек. Лучшие результаты получены при флуорохромировании бактерий не в объеме пробы, а непосредственно на мембранном фильтре при помещении его бактериями вверх на поверхность раствора флуорохрома. Время флуорохромирования 15 мин при температуре 20 С. Необходимым условием является высушивание мембранных фильтров до и после флуорохромирования. Разработан ускоренный вариант метода. В этом случае для флуорохромирования используют горячий ( 70 С) раствор лактата этакридина, время экспозиции сокращают до 2 мин, а мембранные фильтры высушивают сухим жаром, что сокращает продолжительность операции в 10 раз.
По нашим данным, акридиновый оранжевый весьма пригоден для обнаружения внутриклеточных вирусных включений. Но данным Авакяна с сотрудниками прижизненное флуорохромирование этим красителем крайне ускоряет и упрощает обнаружение патологических изменений в клетках культуры тканей, зараженных вирусом полиомиелита, что весьма полезно для диагностики этого заболевания.
Вирусные включения, возникающие при поражении вирусом мозаики растений табака, огурца, лука и других, не люминесцируют. Для их выявления был использован прием флуорохромирования с применением люминесцентной микроскопии.
Мейсель и Корчагин[12]на виділених з клітин нуклеїнових кислотах і їх похідних показали, що акридіновий помаранчевий, зв'язуючись з дезоксирибонуклеїнової кислотою (ДНК) або ДНК-протеїди, надає їм яскраво-зелену люмінесценцію, в той час як комплекси цього флуорохромов з рибонуклеїнової кислотою (РНК) і її Протеїди ЛЮМІНА-сціруют червоним світлом. Такі співвідношення ними були виявлені в разі прижиттєвого флуорохромірованія клітин. Акридіновий помаранчевий в цих умовах виявився вельми корисним цитохімічним реактивом. Різна ступінь зв'язування акридинового оранжевого з ДНК і РНК залежить, по-видимому, від різного ступеня полімеризації цих кислот.

Внаслідок дуже високої чутливості люмінесцентного методу для фарбування використовують сильно розведені розчини флуорохромов (С-10 - - 5 - 5 - 10 - 6 моль /л), хімічний вплив яких на досліджуваний об'єкт, і зокрема на клітини організму, невелика. Це дозволяє шляхом внутрішньовенного або підшкірного вливання проводити прижиттєве флуорохромірованіе окремих органів людини і тварин, що має виключно важливе значення при біологічних дослідженнях.

Переважна більшість мікроорганізмів не має скільки-небудь вираженої і характерною власної люмінесценції. У цих випадках доцільно виробляти дослідження власної люмінесценції, у всіх же інших випадках доводиться вдаватися до флуорохромірованію. Наприклад, при вивченні препаратів і мазків з тканин і рідин, подучается екпортувати з організму тварин і людини, зразків грунтів, а також центри-фугато води, водних змивів з різних предметів безпосереднє флуорохромірованіе дозволяє швидко і надійно виявляти в них бактерії і виробляти їх кількісний облік . Про видової приналежності бактерій, виявлених прямим флуорохромірованіем, без додаткових досліджень судити важко.

У Ленінградському філії ВНДІ медичного приладобудування при нашому консультацій з розроблений метод і на його основі прилад для визначення загальної мікробної (білкової) забрудненості води із застосуванням флуорохромірованія.

Флуорохромірованіе проводять або прижиттєве, або на фіксованих препаратах. Прижиттєве флуорохромірованіе в свою чергу може бути здійснено або на цілому тваринному або рослинному організмі (шляхом ін'єкції або введення з їжею), або на окремих тканинах і клітинах. Прижиттєве флуорохромірованіе особливо корисно при дослідженнях функціонального стану і фізико-хімічної характеристики органів, тканин і клітин.

Цей барвник дає яскраву флуоресценцію всіх мікроорганізмів природної води, різноманітних за видовим складом, добре диференціює бактеріальні клітини від сторонніх частинок. Кращі результати отримані при флуорохромірованіі бактерій не в обсязі проби, а безпосередньо на мембранному фільтрі при приміщенні його бактеріями вгору на поверхню розчину флуорохромов. Час флуорохромірованія 15 хв при температурі 20 С. Необхідною умовою є висушування мембранних фільтрів до і після флуорохромірованія. Розроблено прискорений варіант методу. В цьому випадку для флуорохромірованія використовують гарячий (70 ° С) розчин лактату етакрідіна, час експозиції скорочують до 2 хв, а мембранні фільтри висушують сухим жаром, що скорочує тривалість операції в 10 разів.

У наших дослідженнях розроблено отримання нелюмінесцірующіх мембранних фільтрів. За кордоном такі фільтри випускає промисловість, що значно спрощує метод і робить його придатним для практики. Застосування прямого флуорохромірованія, на думку Є. М. Левиной (1968), надає люмінесцентному методу значну чутливість, забезпечує швидкість і простоту аналізу.

Швидке і специфічне виявлення будь-яких речовин або організмів за допомогою флуоресціюючих метчиков часто виконують за допомогою люмінесцентного мікроскопа. Для прямого флуорохромірованія клітин використовують акридіновий помаранчевий, риванол, профлавін (див. Гл. Великі частинки складаються з клітин фітопланктону, обривків тканин більших організмів, яскраво забарвлених, блідо-рожевих, безбарвних, зеленуватих. Складаючи всього 3% від загальної кількості частинок , за своїми розмірами і біомасі вони в багато разів перевершують мікробні клітини. При використанні флуорохромірованія мікроорганізмів в обсязі проби світіння цих частинок викличе велику помилку, тому в таких випадках необхідно передбачати звільнення проби від великих часток перед визначенням. У цих випадках неминучі втрати адсорбованих мікроорганізмів і відповідна помилка підрахунку.

Цей барвник дає яскраву флуоресценцію всіх мікроорганізмів природної води, різноманітних за видовим складом, добре диференціює бактеріальні клітини від сторонніх частинок. Кращі результати отримані при флуорохромірованіі бактерій не в обсязі проби, а безпосередньо на мембранному фільтрі при приміщенні його бактеріями вгору на поверхню розчину флуорохромов. Час флуорохромірованія 15 хв при температурі 20 С. Необхідною умовою є висушування мембранних фільтрів до і після флуорохромірованія. Розроблено прискорений варіант методу. В цьому випадку для флуорохромірованія використовують гарячий (7б С) розчин лактату етакрідіна, час експозиції скорочують до 2 хв, а мембранні фільтри висушують сухим жаром, що скорочує тривалість операції в 10 разів.

При флуорохроміроваііі жирів і ліпоїдів різними флуорохромами також можуть бути виявлені їх особливості за специфічним характером люмінесценції. Перспективним тут слід вважати комбіноване використання різних жірорастворітелей з флуорохромами. Особливий інтерес представляють можливості, що відкриваються при прижиттєвому флуорохромірованіі.

Розглянутий метод обмежений тим, що далеко не всі об'єкти дослідження мають власної люмінесценції у видимій області, а деякі дають однотонну малоконтрастних картину. У таких випадках доводиться вдаватися, як і в звичайній мікроскопії, до штучного фарбування препаратів флуоресціюючими барвниками. Такі барвники називають флуктуації-орохромамі, а фарбування ними - флуорохромірованіем. Таким способом можна практично майже всі речовини і мікроструктури перетворити в люмінесцирующие.

Такі мазки потім обробляють розчином примули-ну (1: 500 - 1: 1000) на 2% - ном водному розчині фенолу. Левадіті воліє обробляти препарати, що містять віруси, тіофлавіном. За останній час ряд авторів рекомендує застосування акридинового оранжевого для флуорохромірованія елементарних тілець вірусів[19]як в свіжих, так і фіксованих препаратах.

Найбільш чутливим до точного дотримання всіх умов досвіду є акридіновий помаранчевий. Так, було підтверджено наявність залежності кольору флуоресценції бактерій від концентрації барвника. Для прімуліна з успіхом можна користуватися широким діапазоном значень рН середовища при флуорохромірованіі, але для акридинового оранжевого зміна рН на одиницю з 5 5 до 5 6 може привести до протилежного тлумачення результатів.

Переважна більшість мікроорганізмів не має скільки-небудь вираженої і характерною власної люмінесценції. У цих випадках доцільно проводити дослідження власної люмінесценції, у всіх же інших випадках доводиться вдаватися до флуорохромірованію. Наприклад, при вивченні препаратів і мазків з тканин і рідин, подучается екпортувати з організму тварин і людини, зразків грунтів, а також центри-фугато води, водних змивів з різних предметів безпосереднє флуорохромірованіе дозволяє швидко і надійно виявляти в них бактерії і виробляти їх кількісний облік . Про видової приналежності бактерій, виявлених прямим флуорохромірованіем, без додаткових досліджень судити важко.

Цей барвник дає яскраву флуоресценцію всіх мікроорганізмів природної води, різноманітних за видовим складом, добре диференціює бактеріальні клітини від сторонніх частинок. Кращі результати отримані при флуорохромірованіі бактерій не в обсязі проби, а безпосередньо на мембранному фільтрі при приміщенні його бактеріями вгору на поверхню розчину флуорохромов. Час флуорохромірованія 15 хв при температурі 20 С. Необхідною умовою є висушування мембранних фільтрів до і після флуорохромірованія. Розроблено прискорений варіант методу. В цьому випадку для флуорохромірованія використовують гарячий (7б С) розчин лактату етакрідіна, час експозиції скорочують до 2 хв, а мембранні фільтри висушують сухим жаром, що скорочує тривалість операції в 10 разів.

При вивченні живого організму тварин флуорохромом забарвлюють оголену поверхню їх органів або виробляють його внутрішнє вливання. Струмом крові флуорохром розноситься по організму і при освітленні ультрафіолетовими променями яскраво люминесцирует, фарбуючи ділянки шкіри або слизової оболонки. Метод флуорохромірованія використовується також при вивченні циркуляції крові та інших рідин в організмі.

Внаслідок дуже високої чутливості люмінесцентного методу для фарбування використовують сильно розведені розчини флуорохромов (С-10 - - 5 - 5 - 10 - 6 моль /л), хімічний вплив яких на досліджуваний об'єкт, і зокрема на клітини організму, невелика. Це дозволяє шляхом внутрішньовенного або підшкірного вливання проводити прижиттєве флуорохромірованіе окремих органів людини і тварин, що має виключно важливе значення при біологічних дослідженнях. Так, прижиттєве флуорохромірованіе барвником акридиновим помаранчевим (С-1: 1105) дозволяє спостерігати за функцион-станами клітин кори головного мозку різних тварин, виявляючи найтонші структурні елементи мозкової тканини.

Люмінесцентний аналіз виявлення широко використовують для контролю якості лікарських препаратів і при вивченні механізму їх дії. Опромінення уражених ділянок шкіри ультрафіолетовими променями дозволяє швидко встановлювати природу захворювання і межі його поширення. Так, при флуорохромірованіі барвником акридиновим помаранчевим вдається відрізняти різні види раку шкіри і саркоми.

Переважна більшість мікроорганізмів не має скільки-небудь вираженої і характерною власної люмінесценції. У цих випадках доцільно проводити дослідження власної люмінесценції, у всіх же інших випадках доводиться вдаватися до флуорохромірованію. Наприклад, при вивченні препаратів і мазків з тканин і рідин, подучается екпортувати з організму тварин і людини, зразків грунтів, а також центри-фугато води, водних змивів з різних предметів безпосереднє флуорохромірованіе дозволяє швидко і надійно виявляти в них бактерії і виробляти їх кількісний облік . Про видової приналежності бактерій, виявлених прямим флуорохромірованіем, без додаткових досліджень судити важко.

Цей барвник дає яскраву флуоресценцію всіх мікроорганізмів природної води, різноманітних за видовим складом, добре диференціює бактеріальні клітини від сторонніх частинок. Кращі результати отримані при флуорохромірованіі бактерій не в обсязі проби, а безпосередньо на мембранному фільтрі при приміщенні його бактеріями вгору на поверхню розчину флуорохромов. Час флуорохромірованія 15 хв при температурі 20 С. Необхідною умовою є висушування мембранних фільтрів до і після флуорохромірованія. Розроблено прискорений варіант методу. В цьому випадку для флуорохромірованія використовують гарячий (70 ° С) розчин лактату етакрідіна, час експозиції скорочують до 2 хв, а мембранні фільтри висушують сухим жаром, що скорочує тривалість операції в 10 разів.

З'єднання дзеркально-лінзового конденсора з мікроскопом. Крім звичайних, люмінес - (ЩЩЩЩЖ Ш процентних методів дослідження препаратів, в лабораторній практиці мікроскопії відомі методи абсорбційної мікроскопії. Вони ставлять собі ту ж задачу виявлення деталей мікрооб'єктів шляхом отримання фотографій в прохідному фільтрованому ультрафіолетовому світлі. Ці методи дозволяють вести прижиттєві біологічні спостереження, так як досліджувані препарати ніякій обробці - фарбування або флуорохромірованію не наражати.